二氧化碳孵箱是细胞培养、微生物实验及组织工程研究的核心设备,其通过精准控制温度、湿度和二氧化碳浓度,模拟体内生理环境,保障样本稳定生长。但高温高湿的内部环境极易滋生细菌、真菌、支原体等污染物,导致实验数据失效、样本损坏甚至实验项目终止。为杜绝污染隐患,保障实验可靠性,结合设备特性与实操经验,制定本使用规范。

使用前准备是防污染的第一道防线。需提前检查孵箱外观及密封性,确认门封条无破损、无污渍,避免外界空气渗入。用70%酒精擦拭孵箱内壁、搁板及水盘,杜绝残留污染物。水盘需注入无菌蒸馏水,可添加少量硫酸铜抑制细菌生长,严禁使用自来水或普通超纯水,防止微生物带入。同时校准温度、二氧化碳浓度及湿度传感器,确保参数精准,新设备或长期停用后,需空箱运行24小时并完成灭菌,方可放入样本。
规范操作流程,减少人为污染。操作人员需穿戴无菌实验服、手套,操作前用消毒剂清洁手套,避免徒手接触样本及孵箱内部构件。样本放入时需分区摆放,保留10%-15%空隙保障气流均匀,避免堆叠,培养瓶盖子朝向门外,防止冷凝水滴落污染样本。严格控制开门频率与时间,单次开门不超过30秒,减少内外环境交换导致的污染风险及参数波动。所有放入孵箱的器皿、耗材需经高压蒸汽灭菌或75%酒精擦拭消毒,培养基需提前预平衡,避免温差刺激样本及环境波动。
定期维护消毒,阻断污染滋生。执行常态化清洁:每周消毒水盘并更换无菌水,每月用非腐蚀性消毒剂擦拭孵箱内部及高频接触点,每6个月进行一次深度净化循环及传感器校准。配备过滤系统的孵箱,需按制造商要求定期更换过滤器,阻挡空气中的微生物进入。禁止使用含氯消毒剂,防止腐蚀内胆,顽固污渍可用1%SDS溶液浸泡后擦拭处理。
强化应急处理,降低污染影响。发现孵箱内有污染迹象,立即取出所有样本,区分污染与未污染样本并妥善处理,避免交叉污染。清洁孵箱内壁、搁板及水盘,采用高温干热灭菌或*消毒方式进行全面灭菌,确认无残留后再重启设备。做好使用及维护记录,详细标注操作时间、参数、清洁情况及异常处理过程,便于追溯排查。
规范使用二氧化碳孵箱,是保障实验质量、延长设备寿命的关键。全体操作人员需严格恪守本规范,树立“预防为先、全程管控”的防污染意识,将每一个操作细节落到实处,从源头阻断污染途径,为科研实验提供洁净、稳定的环境支撑。